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Veröffentlichter Artikel oder Aufsatz

Publikationsart: Veröffentlichter Artikel oder Aufsatz
Autor(en): Thorsten Wille; Britta Barlag; Vladimir Jakovljevic; Michael Hensel; Victor Sourjik; Roman Gerlach
Titel: A Gateway-Based System for Fast Evaluation of Protein-Protein Interactions in Bacteria
Erschienen in: PLoS ONE 10 (4) , 2015
S. 1-18
Verlag: Public Library of Science
Verlagshinweis: Wille T, Barlag B, Jakovljevic V, Hensel M, Sourjik V, et al. (2015)
A Gateway-Based System for Fast Evaluation of Protein-Protein Interactions in Bacteria.
PLoS ONE 10(4): e0123646.
Verlags-URL: http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0123646
DOI: 10.1371/journal.pone.0123646
Veröffentlichung auf edoc: 21.04.2015
Status: published
Volltext: pdf (urn:nbn:de:0257-10039331)
Schlagwörter (eng): Bacterial/genetics, Escherichia coli/genetics, Bacterial Proteins/metabolism, Membrane Proteins/genetics, Membrane Proteins/metabolism, DNA, Plasmids, Bacterial Proteins/genetics, Salmonella/genetics, Escherichia coli/metabolism, Cloning Molecular, Fluorescence Resonance Energy Transfer, Genetic Vectors, Luciferases/genetics, Microfilament Proteins/genetics, Microfilament Proteins/metabolism, Protein Interaction Maps/genetics, Salmonella/metabolism
Vorhaben/Arbeitsgruppe: Robert Koch-Institut
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Abstract (eng):
Protein-protein interactions are important layers of regulation in all kingdoms of life. Identification and characterization of these interactions is one challenging task of the post-genomic era and crucial for understanding of molecular processes within a cell. Several methods have been successfully employed during the past decades to identify protein-protein interactions in bacteria, but most of them include tedious and time-consuming manipulations of DNA. In contrast, the MultiSite Gateway system is a fast tool for transfer of multiple DNA fragments between plasmids enabling simultaneous and site directed cloning of up to four fragments into one construct. Here we developed a new set of Gateway vectors including custom made entry vectors and modular Destination vectors for studying protein-protein interactions via Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET), Bacterial two Hybrid (B2H) and split Gaussia luciferase (Gluc), as well as for fusions with SNAP-tag and HaloTag for dual-color super-resolution microscopy. As proof of principle, we characterized the interaction between the Salmonella effector SipA and its chaperone InvB via split Gluc and B2H approach. The suitability for FRET analysis as well as functionality of fusions with SNAP- and HaloTag could be demonstrated by studying the transient interaction between chemotaxis response regulator CheY and its phosphatase CheZ.
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Generiert am 19.09.2017, 20:53:38