Untersuchungen zur Expression und Funktion der HERV-K(HML-2) kodierten Proteine Rec und Np9

Abstract

Die Genprodukte der doppelt gespleißten mRNA-Transkripte rec und np9 der HERV-K(HML- 2)-Proviren im humanen Genom besitzen Domänen für die Interaktion mit dem promyeloisch leukämischen Zinkfinger Protein (PLZF) und verursachen durch die Bindung an PLZF dessen Inaktivierung. Die Inaktivierung des Transkriptionsfaktors bedingt eine Veränderung der Genregulation seiner Zielgene, beispielsweise eine Erhöhung von c-myc. In der vorliegenden Arbeit konnten Gene identifiziert werden, die nach transienter Überexpresseion des HERV-K(HML-2) codierten Proteins Rec in humanen HEK-293 Zellen eine differentielle Expression zeigten. Die Analyse der differentiell exprimierten Gene erfolgte mittels Affymetrix Genchipanalyse. Die Expression der differentiell exprimierten Gene wurde mit Hilfe der real time PCR bestätigt. Die Gene HDAC3 (Gene Histon deacetylase 3), SRY (sex determining region Y)-box 30, Homo sapiens zinc finger protein 256, Interleukin enhancerbinding factor 3 und Splicing factor, proline- and glutamine-rich zeigten sowohl in der Genchip- Analyse, als auch in der real time PCR Analyse eine Heraufregulation. Das RNA-binding protein 9 konnte mit Hilfe der real time PCR als herunterreguliert identifiziert werden. Des Weiteren konnte die Methode der Differential Display-PCR etabliert werden. Damit steht nun eine Methode zur Verfügung, die es erlaubt auch differentiell exprimierte, unbekannte mRNA-Transkripte zu identifizieren. Im dritten Teil dieser Arbeit wurde das ebenfalls von HERV-K(HML-2) codierte Gen np9 codonoptimiert und mittels Gensynthese neusynthetisiert. Die Syntheseprodukte wurden anschließend in den Expressionsvektor pcDNA4A kloniert und die Funktionalität des Systems wurde untersucht. Die Analysen der biologischen Aktivität des Np9 Proteins zeigt einen bereits in der Literatur beschriebenen schnellen Abbau von Np9 und die Lokalisation des Proteins im Zellkern der Zelle. Die gewonnenen Expressionsvektoren können nun für weitere Genchip- oder Differential Display-Analysen zur Verfügung.