Die TaqMan-PCR: Schnelle Typisierung und Subtypisierung von Influenzaviren direkt aus Patientenmaterial

Abstract

Schnellverfahren zum Nachweis von Influenzaviren sind vor allem für nationale Surveillancesysteme von großer Bedeutung. Kommerziell verfügbare Teste sind aufgrund der geringeren Sensitivität und Spezifität nur bedingt einsetzbar. Wir beschreiben die Entwicklung und Evaluierung einer TaqMan-PCR zur Typisierung und Subtypisierung von Influenzaviren direkt aus Rachenabstrichen von Patienten. Die Hybridisierung mit einer fluoreszenzmarkierten Sonde und die Quantifizierung des PCR-Produktes erfolgen simultan während der PCR, so dass die aufwendige Produktanalyse entfällt. Die TaqMan-PCR ist ein sehr spezifisches Verfahren und sensitiver als die Virusanzucht. Untersuchungen mit mehr als 2600 Proben während der Saison 1999/2000 haben gezeigt, dass diese Methode zum schnellen Nachweis einer Influenzavirusinfektion sehr sicher und zuverlässig ist. Das Ergebnis liegt in wenigen Stunden vor und ermöglicht eine aktuelle Einschätzung der epidemiologischen Situation.

Procedures for rapid detection of influenza viruses are especially important for national surveillance programs. The application of available rapid tests is restricted because of their limited sensitivity and specificity. Therefore a TaqMan-PCR was developed for typing and subtyping of influenza viruses in respiratory samples. Time-consuming post-PCR analysis is avoided since hybridization with a fluorogenic probe and quantification of the amplified product is performed simultaneously during PCR cycling. The TaqMan-PCR was much more sensitive than virus culture and revealed an excellent correlation for typing and subtyping of influenza viruses when samples were positive by both methods. Surveillance work during the season 1999/2000 with more than 2,600 throat swabs proved the reliability of the new method for rapid detection of influenza viruses. Results are available within a few hours allowing a more relevant evaluation of the current epidemiological situation.